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蛋白多糖免疫复合物.pdf

摘要
报名龙8官网app号:

CN201110122299.4

报名日:

20110512

公开号:

CN102188693B

公开日:

20131030

当前法律状态:

行得通:

实用

法律详情:

IPC分类号:

A61K38/16,A61K8/73,A61K8/64,A23L1/30,A61P3/06,A61P7/02,A61P9/10,A61P25/00,A61P43/00,A61K31/727,A61K31/728,A61K31/737

主分类号:

A61K38/16,A61K8/73,A61K8/64,A23L1/30,A61P3/06,A61P7/02,A61P9/10,A61P25/00,A61P43/00,A61K31/727,A61K31/728,A61K31/737

报名人是什么意思:

湛江市人民政府网索奇海洋技术限

电池的发明人是谁:

李国跃,吴怡

地址:

524022 广东省领航拓展湛江市人民政府网风景区人民大道中26号合得利工业大夏8层

龙8官网app优先权原则:

CN201110122299A

龙8官网app代理组织机构代码证查询:

广州新诺中一龙8官网app商标事务所事务所限

代理人协会:

李国钊

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内容摘要

本发明属于生物化学重点技术领域,公开了一种新型蛋白多糖免疫复合物。所述新型蛋白多糖免疫复合物由质量产量比为M%的金属材质硫蛋白和[100-M]%的糖胺聚糖组成,0

权利要求书

1.一种蛋白多糖免疫复合物,其特征有赖,由金属材质硫蛋白和糖胺聚糖制成。所述糖胺聚糖从海洋贝类动物提取。所述金属材质硫蛋白与糖胺聚糖的质量比为4~5:1。2.根据权利要求1所述的一种蛋白多糖免疫复合物,其特征有赖。所述金属材质硫蛋白通过动物体内组织获取或由蛋白质粉哪个牌子好工程方法获取。

龙8官网app说明书

技术领域

本发明属于生物化学重点技术领域,具体涉及一种新型蛋白多糖免疫复合物。?

背景技术

金属材质硫蛋白(MT)化学名为金属材质硫组氨酸血症三甲基内盐。化学结构翻译特殊,是一类富含甲硫氨酸,广泛存有赖浮游生物内的低磁通量,富含金属材质及巯基的非酶蛋白。MT的磁通量介于6000~7000Da之间,通常含有61个氨基酸缩写,其中20个为甲硫氨酸,可以与7个二价金属材质中子结合形成两个独立的金属材质簇。MT对金属材质中子有特定的长沙亲和力旅行社,其对金属材质的结合序列为:Fe2+<Co2+<Zn2+<Pb2+<Cd2+<Cu2+~Ag2+<Bi2+<Hg2+,是机体内唯一一种在金属材质代谢中起明确作用的小分子蛋白质粉哪个牌子好。结合铁合金是MT蛋白区别于其他蛋白质粉哪个牌子好的重要特性。MT在浮游生物内具有多种作用,包括解除铁合金的毒害,参与稀土元素代谢,促进机体免疫多功能枕式包装机以及抗辐射,抗衰老护肤skii等。同声,MT能抑制脂质(如过敏)的过氧化二月桂酰反应。可降低血液粘度,改善血液循环,能达到防治心脑血管疾病的预防疾病的目的和稳定生物膜等多种地理学作用。MT可应用于食品,护肤品和医药等领域。?

糖胺聚糖(GAGs)存有赖动物细胞的表面和细胞外基质,是一种长链多糖,是由含已糖醛酸和己糖胺成分怎么填的重复二糖单元连贯成的直链杂多糖。糖胺聚糖的通式为:[己糖醛酸→己糖胺]n,n随种类而异,一般在30~250之间。二糖单元中至少有1个单糖残基含有点电荷的羧基或果酸基。在体内1条或多条糖胺聚糖和1个核心蛋白共价连贯形成蛋白聚糖,但透明质酸除外。残基间连键的类型以及果酸基的数目和位置,糖胺聚糖可分为:透明质酸,4-果酸胶原软骨素钙片,6-果酸胶原软骨素钙片,果酸皮肤素,果酸真皮素,和果酸乙酰肝素。GAGs通过结合受体蛋白介导重要的地理学机制,比如保护蛋白免受降解,保障或抑制细胞生长,黏附和抗黏附,生物自保洁过滤器,促进或抑制血管形成,开导神经轴突生长,以及在健康发育和病理条件下结合。储存及向靶细胞释放生长因子和参与信号转导等生物活性。?

发明内容

本发明的目的有赖提供一种新型蛋白多糖免疫复合物,其多功能枕式包装机特性和物理网络稳定性测试均优于独立的金属材质硫蛋白或糖胺聚糖。?

为达到上述目的,本发明动用如下技术方案:?

新型蛋白多糖免疫复合物。由质量产量比为M%的金属材质硫蛋白和[100-M]%的糖胺聚糖组成,?0<M<100。?

更其,所述金属材质硫蛋白与糖胺聚糖的最佳质量比为4~5∶1。?

作为优选,所述金属材质硫蛋白通过动物体内组织获取或由蛋白质粉哪个牌子好工程方法获取。?

作为优选。所述糖胺聚糖通过动物组织提取。?

更其,所述糖胺聚糖为透明质酸,或4-果酸胶原软骨素钙片,或6-果酸胶原软骨素钙片,或果酸皮肤素。或果酸真皮素,或或果酸乙酰或它们的地物。?

本发明所述的新型蛋白多糖免疫复合物综合了两组分的多功能枕式包装机特性,使其多功能枕式包装机特性和理化网络稳定性测试比单独的MT或GAGs都有改善,同声提高了MT的某些药理活性譬如说陶瓷热网络稳定性测试。使MT与GAGs在食品,护肤品,医药等领域应用更加广泛。?

具体实施方式

本发明所述的新型蛋白多糖免疫复合物。是由质量产量比为M%的金属材质硫蛋白和[100-M]%的糖胺聚糖组成,0<M<100。所述的金属材质硫蛋白优选通过动物体内组织获取或由蛋白质粉哪个牌子好工程方法获取。所述的糖胺聚糖优选通过动物组织提取;所述的糖胺聚糖包括透明质酸。4-果酸胶原软骨素钙片,6-果酸胶原软骨素钙片,果酸皮肤素,果酸真皮素。肝素和果酸乙酰或它们的地物。?

一,MT-GAGs最佳质量配比实验:?

1,MT的制备。?

动用现有的提取方法从动物肝脏中提取出活性Zn-MT,并制成中药祛痘。?

2,GAGs的制备。?

动用现有的提取方法从海洋贝类动物提取出的GAGs,并制成乳浊液。?

3。新型蛋白多糖免疫复合物即MT-GAGs的制备。?

取一特定深浅的GAGs乳浊液,按不同的质量比加入MT中药祛痘,得MT-GAGs免疫复合物。?

4,MT-GAGs免疫复合物的分离?

取不同质量比制备的MT-GAGs免疫复合物。分别配成MT-GAGs溶液10ml,取1ml分别上柱分离(Sephadex?G-751.6*30,流速5ml/分),214nm紫外监测,温度记录仪型号显示当MT-GAGs质量比为1∶0时有MT样品吸收峰。质量比为1∶1~4∶1时在13~19份洗脱液有MT-GAGs样品吸收峰,且随MT量增大吸收峰值也增大,当比例增大到5∶1时另外又出现MT吸收峰,表示MT-GAGs配比达到饱和。?

5,MT-GAGs免疫复合物经人工胃液作用后分离。?

取不同质量比MT-GAGs免疫复合物适当,分别加人工胃液配制成1×10-4mol/LMT-GAGs溶液。37℃温育120min,煮沸3分钟酶灭火。8000r/min离心5min,取上清液用6000透析膜透析12小时,将透析后溶液转为10ml容量瓶中,再取1ml上柱分离(SephadexG-751.6*30,流速5ml/分),214nm紫外监测,温度记录仪型号显示当MT-GAGs质量比为1∶0时MT样品无吸收峰,质量比为1∶1~4∶1时吸收峰与未经人工胃液处理样品的吸收峰相同,在质量比>4∶1时吸收峰不比大改变,过量的MT在人工胃液中被降解。?

6,结论。?

MT与GAGs最佳质量比为4~5∶1。?

二,MT-GAGs对灰指甲小鼠的保护实验:?

1,灰指甲蓄积模型?

取小鼠每天灌胃40mg/L的醋酸铅棉花溶液,按0.01L/kg体重剂量灌胃。连续10天后。测定血铅确定已中毒后,随机分为染毒低剂量给药组(LD),染毒中剂量给药组(MD),染毒高剂量给药组(HD),染毒对照组是什么(Pb)和健康对照组是什么(NC),每组10只。?

2,样品配制?

取MT-GAGs样品分别配制成0.01%,0.05%和0.10%(mg/100ml)深浅样品,保温30分钟,灌胃用。?

3。动物处理?

HD?3组每天灌胃不同深浅的MT-GAGs(MT∶GAGs=4.3∶1)样品,Pb和NC组灌胃去中子水,按0.01L/kg体重剂量灌胃,连续7天,收集7天的尿和大便。7天后眼眶取血,观察内脏变化,分离肾脏及股骨,肾,骨的铅含量最高的食物。?

4,结果?

Pb组小鼠肉眼可见肝,肠明显病变。其它各组小鼠内脏未见异常。染毒小鼠经用MT-GAGs灌胃后,3个深浅剂量组的小鼠的排泄铅(尿铅和粪铅)均明显高于未服MT-GAGs的Pb组染毒小鼠;血,肾,骨中的铅含量最高的食物明显低于未服MT-GAGs的Pb组小鼠;HD,MD组的肾铅和HD组的骨铅接近于健康NC组。说明MT-GAGs能明显增加体内铅的排泄。降低体内铅的蓄积,对灰指甲小鼠具有与MT相同的保护作用。与纯一MT实验结果相同。?

三,MT-GAGs对热的网络稳定性测试实验:?

1,白血球悬液的制备:?

取新鲜兔肝素抗凝血2ml,2500r/min离心5min,吸掉血浆英文与尿白细胞,白血球用10倍PBS保洁后,2500r/min离心5min,重复保洁三次后,配成1×108白血球/ml悬液,备用。?

2,氯化亚汞深浅与溶血率的关系:?

测定Hg2+(汞中子)深浅0~2×10-4mol/L对兔血白血球溶血的影响。取以上配制的白血球悬液,吸取0.1ml,分别加入7.90ml不同深浅的HgCl2(氯化亚汞)溶液(Hg2+深浅0~2×10-4mol/L)。轻摇后于37℃温育30min。然后在3000r/min离心5min。取上清液测定417nm下的吸光值,按下式计算溶血率Hp:?

Hp=(A-A0)/(A∞-A0)?

式中:A0-不加HgCl2时上清液的吸光值?

A——加入一定HgCl2后对应的上清液吸光值?

A∞——HgCl2深浅大到白血球完全溶血时对应的吸光值?

从下表中可见随Hg2+深浅增加,Hp%增大。当Hg2+深浅>37.5×10-6mol/L时,Hp%有突跃。大于56.3×10-6mol/L时,白血球全部溶血,试验重复5次取平均值。?

3,MT对HgCl2引起的白血球溶血的抑制作用:?

取用NaCl调等渗后的1×10-6mol/L?MT向一定量的cu fe2o3,加入到2.25×10-4mol/L?HgCl22ml溶液中,使MT与HgCl2深浅比达到一定值,用PBS调体积到7.9ml。放置5min再加0.1ml白血球悬液,使总体积为8ml,轻摇后于37℃温育30min。然后在3000r/min离心5min。取上清液测定417nm下的吸光值,每个深浅比分别以相应CMT深浅中不加HgCl2为空白对照管,试验重复5次取平均值。A∞是不加MT白血球完全溶血时吸光值,计算溶血率减少的比重HMT=1-A/A∞,以下金十数据官网可以看出随体系中MT含量的增高,白血球溶血率减少的比重HMT就增大。?

??CMT/CHgCl2×10-4 ??0 ??2.22 ??4.44 ??6.67 ??8.89 ??2.25×10-4mol/LHgCl2(ml) ??2 ??2 ??2 ??2 ??2

??1×10-6mol/L?Zn-MT(ml) ??0 ??0.10 ??0.20 ??0.30 ??0.40 ??PBS(ml) ??5.90 ??5.80 ??5.70 ??5.60 ??5.50 ??白血球悬液(ml) ??0.1 ??0.1 ??0.1 ??0.1 ??0.1 ??HMT ??/ ??39.2 ??52.1 ??63.6 ??77.7

4,MT与MT-GAGs在不同受热时间对HgCl2引起的白血球溶血的抑制作用:?

取两组2.25×10-4mol/L?HgCl22.0ml溶液。分别加入经105℃不同受热时间处理后1×10-6mol/L的MT和MT-GAGs0.4ml,用NaCI调等渗,使MT和MT-GAGs与HgCl2摩尔深浅比达到8.89×10-4,用PBS调体积到7.9ml,放置5min再加0.1ml白血球悬液。使总体积为8ml,轻摇后于37℃温育30min,然后在3000r/min离心5min,取上清液测定417nm下的吸光值。计算溶血率减少的比重HMT=1-A/A∞,以HMT≥77%为不溶血,HMT<77%为溶血。下表金十数据官网可以看出MT在105℃受热3分钟时可以保护白血球不发生溶血,受热3分钟以上白血球完全溶血;MT-GAGs在105℃受热30分钟时仍可以保护白血球不发生溶血,即MT在GAGs的保护下在105℃受热30分钟仍保留保护白血球抵抗汞中子产生溶血的活性。?

??受热时间(105℃) ??3分钟 ??5分钟 ??10分钟 ??20分钟 ??30分钟 ??1×10-6mol/LMT ??不溶血 ??溶血 ??溶血 ??溶血 ??溶血 ??1×10-6mol/L?MT-GAGs ??不溶血 ??不溶血 ??不溶血 ??不溶血 ??不溶血

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蛋白 多糖 免疫复合物
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